Готовим жидкую споровую взвесь
ШАГ 1. День 1. Как приготовить жидкую споровую взвесь без главбокса?
Ты уже подготовил все необходимое для старта гровинга. Теперь тебе предстоит подготовить жидкую споровую взвесь.
Если у тебя уже есть готовая взвесь, то пропускай этот раздел и переходи на следующий этап —
ШАГ 2. День 1. Выбор и подготовка субстрата
Что такое споровая взвесь?
Споровая взвесь — это жидкая среда (стерильная вода), в которой споры грибов проходят гидратацию (регидрацию). Она является инструментом для транспортировки спор на стерильный субстрат (инокуляция).
Зачем делать споровую взвесь?
Обратимся за ответом к природе, ведь весь процесс гровинга — это симуляция природных условий.
После раскрытия шляпок гриб начинает разбрасывать споры. Такие свежие споры полностью готовы к прорастанию, они содержат в себе достаточно влаги. Но спустя короткое время они обезвоживаются и клеточные стенки спор сворачиваются к центру. Так они переходят в состояние покоя на период засухи и ожидают сезона дождей.
Для того чтобы воспроизвести сезон дождей, тем самым пробудив и подготовив споры к вегетации, мы помещаем их в стерильную воду в шприце.
Кроме того, споровая взвесь является самым простым и доступным методом инокуляции субстрата для начинающих культиваторов.
Другие методы инокуляции будут рассмотрены непосредственно в разделе инокуляция.
Видео «Как приготовить жидкую споровую взвесь в зип-пакете без главбокса»
В видео представлен самый простой метод приготовления жидкой споровой взвеси.
Он позволяет обойтись без главбокса или SAB (still air box). Однако он достаточно расточительный в плане того, что тебе придется пожертвовать всем отпечатком сразу.
Метод с частичным использованием спорового отпечатка может показаться тебе более экономными, но именно поэтому он требует идеальных стерильных условий.
Но в этом разделе мы расскажем как сделать бОльший объём взвеси, разбавив её.
Не поленись ознакомиться с детальным описанием всего процесса, так как видео показана только суть!
Что нужно для приготовления споровой взвеси
Для самостоятельной подготовки жидкой споровой взвеси тебе понадобится:
1️⃣ Споровый отпечаток в зип-пакете. В идеале нужен стерильный споровый отпечаток. Забегая немного наперёд отмечу, что если есть сомнения в стерильности отпечатка, то за 20 минут до инокуляции я рекомендую добавлять антибиотик (гентамицин или аналог) во взвесь. Если же отпечаток стерильный, то антибиотик не понадобится. Детальный процесс и условия добавления антибиотика во взвесь мы рассмотрим в разделе Инокуляция.
2️⃣ Стерильный шприц. Один шприц на один споровый отпечаток. Объем шприца минимум 5 мл. Если использовать шприцы средних и больших объемов на 10-20-30 мл, тогда ты сможешь разбавить споровую взвесь и получить больше материала для инокуляции. Ниже я расскажу как это сделать.
3️⃣ Ампула с водой для инъекций минимум 5 мл. Одна ампула на один споровый отпечаток. Если будешь разбавлять взвесь, то понадобится дополнительная вода для инъекций. Еще 5-15-25 мл для шприцев объёмом 10-20-30 мл соответственно.
4️⃣ Нож для резки ампулы или обычный кухонный нож.
5️⃣ Спирт этиловый 70%-ный во флаконе или в бутылочке-спрей.
Некоторые гроверы используют антисептики или хлоргексидин в качестве замены спирта. Кто-то использует даже водку или самогон. Однако спирт испаряется быстрее и не оставляет лишней воды. Любую замену спирту я не рекомендую. Я использую исключительно 70%-ный раствор этилового спирта без каких-либо примесей и добавок. Можно использовать 96%-ный. Но на самом деле 70%-ный даже надежнее, потому что с бОльшим содержанием воды в растворе он лучше проникает через мембраны бактерий, в то же время достаточно быстро испаряется.
6️⃣ Экипировка гровера: перчатки, маска, шапочка, халат/дождевик.
7️⃣ Ватные диски — 2-3 шт.
8️⃣ Стол и стул.
Предварительная подготовка
1️⃣ Надень на себя экипировку гровера: маска, шапочка, перчатки, медицинский халат (или полиэтиленовый дождевик).
2️⃣ Обработай стол спиртом. Можно протереть стол ватным диском смоченным спиртом или нанести спирт на стол с распылителя и протереть ватным диском. Я использую спирт в виде спрея, так удобнее.
3️⃣ Обработай спиртом перчатки, хорошо протри руки по всей поверхности перчаток.
4️⃣ Обработай спиртом рукава халата (или дождевика) до локтя.
5️⃣ Протри спиртом все, что у тебя есть на рабочем столе: ампулу с водой для инъекций, зип-пакет со споровым отпечатком, нож для ампулы, упаковку шприца и даже сам флакон со спиртом.
6️⃣ Спирт не жалей!
7️⃣ Если имеется бактерицидная УФ лампа используй ее за 30 минут до манипуляций. Также можно использовать SAB, главбокс, ламинарный поток. Но если всего этого нету в наличии, то можно обойтись.
Пошаговое приготовление споровой взвеси
Во время подготовки взвеси не нависай над рабочим столом всем телом. Старайся, чтобы над столом были только твои ладони и кисти рук.
1️⃣ Открой ампулу с водой для инъекций.
2️⃣ Вскрой шприц, надень на него иглу и наполни его водой для инъекций из ампулы.
3️⃣ Зип-пакет со споровым отпечатком не открывай! Протри его спиртом еще раз.
4️⃣ Проткни зип-пакет иглой шприца ближе к клапану. Выдави воду со шприца в зип-пакет.
5️⃣ Не вытаскивая иглу из зип-пакета, одной рукой зажми место прокола с иглой, а другой потри сквозь зип-пакет сам носитель со спорами, чтобы споры отделились и смешались с водой.
6️⃣ Втяни шприцем воду со спорами.
7️⃣ Вытащи иглу из зип-пакета и обработай её спиртом. Надень на иглу шприца защитный колпачок. Следи, чтобы открытая игла ни к чему не прикасалась. Не клади шприц на стол без защитного колпачка!
8️⃣ Потруси шприц, чтобы споры перемешать с водой и оберни его фольгой для обеспечения условий темного места.
9️⃣ Подпиши штамм (стрейн).
🔟 Оставь готовую споровую взвесь для регидрации на 24 часа при комнатной температуре (+20+25°С).
Если споровый отпечаток хранился 2 года и более, то понадобится более длительная регидрация спор. Каждый год хранения увеличивает длительность регидрации на 1 сутки. 2 года хранения — 2 суток регидрации, 3 года — 3 суток регидрации и т.д. А можно просто оставить их в воде на неделю. Хранить взвесь во время длительной гидратации следует в холодильнике при +2°..+8°С.
Как получить бОльший объём взвеси?
Приготовленную споровую взвесь ты можешь разбавить, тем самым увеличив объём сырья для инокуляции в несколько раз. Более того, разбавление взвеси даже рекомендуется! Ведь каждый споровый отпечаток содержит миллионы спор. Кстати, из них около 3-5% способны к продолжению жизни.
Разбавив взвесь, ты сможешь засеять больше банок с субстратом или даже разделить споровую взвесь на несколько попыток. Ведь необязательно использовать всю взвесь сразу. Так ты сможешь увеличить свои шансы на успех и сэкономить ресурс своего спорового отпечатка. Бывает, начинающим гроверам он достается не так уж легко, быстро и дешево.
Можно из шприца со споровой переливать буквально 1 мл взвеси в другой шприц, заполнять оставшийся объем шприца водой и таким образом разбавлять.
Чтобы разбавление было максимально стерильным и исключить контакты споровой взвеси с другими сосудами и воздухом для приготовления взвеси можно сразу использовать шприц среднего или большого объёма. Например, на 10-20 мл или даже 30 мл.
После всех проделанных манипуляций со споровым отпечатком в зип-пакете просто добавь к имеющимся 5-10 мл воды со спорами еще 10-20 мл стерильной воды для инъекций — сколько позволит объем твоего шприца.
Как мы уже говорили ранее, ты можешь использовать лишь часть взвеси для инокуляции. Например, инокулировать 5-10 мл, а оставшиеся 5-10-20 мл в шприце оставить для следующего раза.
Если у тебя уже есть взвесь в шприце на 5 мл, то ты можешь инокулировать 3 мл, а в оставшиеся 2 мл добавить еще 3 мл стерильной воды для инъекций.
Разбавлять взвесь можно до тех пор, пока раствор не станет слегка окрашен спорами.
Если используешь антибиотик, то за 20-30 минут следует добавить его в неразбавленную взвесь. Затем взвесь с антибиотиком разбавить и приступать к инокуляции. Тогда можно будет сэкономить на антибиотике, а разбавленную взвесь с разбавленным антибиотиком можно положить в холодильник на хранение. Так концентрация антибиотика будет не столь опасной для самых выносливых спор.
Расход антибиотика составляет 1 мл на 10 мл взвеси. Если разбавишь взвесь сразу, то соответственно придется увеличить расход антибиотика: 2 мл на 20 мл взвеси и 3 мл на 30 мл взвеси. Использовать взвесь с антибиотиком в такой концентрации желательно в течение 20-30 минут.
Что делать если уже добавил антибиотик во взвесь, а планируешь использовать ее не всю?
Если ты уже добавил антибиотик во взвесь, но планируешь инокулировать лишь часть взвеси, то после инокуляции разбавь взвесь с антибиотиком стерильной водой для инъекций. Так ты снизишь концентрацию антибиотика и самые крепкие споры останутся в живых.
Если у тебя стерильный споровый отпечаток, то антибиотик не нужен! В таком случае не имеет значения, когда разбавлять взвесь. Можешь сразу, а можешь непосредственно перед инокуляцией.
Как долго можно хранить жидкую споровую взвесь?
Споры в жидкой споровой взвеси сохраняют свою жизнеспособность до 1 года. Зафиксированы случаи и более длительного хранения и гровинг был успешный.
Хранить взвесь следует в темном месте. Лучше обернуть шприц фольгой и положить в зип-пакет.
Температура хранения — при +2°..+8°С в холодильнике. Взвесь периодически рекомендуется взбалтывать в течение всего периода хранения.
Перед использованием следует тщательно взболтать шприц, так как споры со временем могут склеиваться.
Проверь шприц на наличие какой-либо подозрительной слизи или новообразований, которые отличаются от сиренево-коричнево-черных спор. Взвесь должна быть прозрачной и однородной.
Детально о добавлении антибиотика в споровую взвесь мы поговорим в разделе Инокуляция
Пока споры будут напитываться водой, не теряй время и переходи к следующему этапу —